(苦读书 www.kudushu.org) “你更喜欢临床？”门诊即将结束时，袁威宏看着方子业脸上笑容绽放得比任何时候都开心，便如此问。
三年来，袁威宏几乎很少看到过自己的学生会这么开心。
方子业看着自己刚提升了创伤外科基础理论后，学识点余额再次攀升到22.1！
转头说：“师父，临床和科研我都喜欢，我其实喜欢对未知探索的过程。”
心里默默说，本来这样探索过程中带来的学识点，才是最让我开心的。可久而久之，我发现这个过程，其实也是一种享受。
“晚上你还要去实验室吧？我就不叫你出去吃饭了。”袁威宏看了看手表上的时间，指向了十七点整，距离下班还有半小时。
“嗯，师父，洛师妹transwell小室实验，今天还要去看一下孵养状态。”方子业点了点头，同时侧身往外再看了一眼，确定暂时没有复诊病人在外候着，这才稍稍把门推了一下。
如此更方便说话。
未下班之前的门诊日清闲时间，其实也是值得享受的。
方子业就给袁威宏的一次性茶水杯里，再接了一杯热水。
“上次那种枞树菌，还能搞得到吗？我可以买一点。”袁威宏忽然这么问了一嘴。
“啊？这个季节已经过时了，十月初，是最后一批，现在很难找了，不过我可以帮您问问，师父。”方子业眼皮快速地闪动了几下。
按理说，老师有想吃的东西，这么好的老师，想方设法也得帮个忙。
只是过季节的山货，这还真不是想办法就能搞得到的，若是那种冰冻的，估计口味又没那么好。
“过了就算了，别费神了，我只是随口一问。别往心里去。”
“你更要上心的事情是好好帮着听竹把申请课题的前期研究做好，她属于是非名额内的博士研究生，邓勇教授一开始不同意她来就读，是因为着实课题基金有限。”
“邓勇教授本来收了的学生，再加上新来的博士研究生，肯定要保证他们先毕业，洛听竹如果想要多拿到基金做课题的话，就得她自己稍微努力一下了。”
“这是没办法的事情。其实她如果待内科，挺好的。”袁威宏转移了话题。
方子业则笑着说：“洛师妹可能是看上了我们骨科老师们的强悍肌肉，才来了我们创伤外科。”
袁威宏闻言一怔。
接着恍惚地摸了摸手表，叹了一口气：“如果原生家庭一般的孩子，有时候美貌不是幸运，还是一种原罪。”
“这就是生活啊，一地鸡毛。”
这个话题太过惆怅，方子业很难感同身受，他自己的家庭，是相对幸福的。如今父母还愿意每个月支援两千左右的生活费。
“哦，对了，子业，你如果细胞实验技术操作都比较好的话，所有的实验流程都可以一次到两次就能解决，我们经费本上，是可以节省腾挪出来一丢丢，给你和揭翰两个人，发点劳务费的。”袁威宏对方子业眨了眨眼睛。
方子业若有所思，眼珠子转了一圈。
不管是任何课题资金，给硕士研究生发一丢丢，比如说三五千的劳务费，是正常，合法、合理、合规的支出。
只是一般的经费本，不会多出来这一笔闲钱。毕竟不是每个人的每个实验流程，都可以一步到位。
是需要好几次才能够成功的，除非是熟练度非常高。
但，方子业觉得自己是有那么一丢丢可能多节省一点实验耗材费用的，如此一来，倒还真有可能一年拿个两三千的劳务费。
只是，这样一横向对比，真的是旱的旱死，涝的涝死了。
“谢谢师父。”方子业也不富裕，就不敢有多余想法了。
袁威宏则摆了摆头：“嗯！”
“经费要好好用，精打细算，该节省的地方可以节省，但不该节省的，千万不能省，严格保证无菌原则，移液管虽然贵，但该用就用，保证实验流程的严谨性。”
“省钱不是这么省的，最主要的是要把这个课题的结果做出来，稍微推动一丢丢科学的门缝儿，这就是我们拿着国家给的钱，该做的事情。”
“还有就是，揭翰如今的科研底蕴非常深厚，他申请市级、校级课题起来，与你的底蕴也都差不多，所以他后续啊，也可能会为我们团队多拿一点钱。”
“一个是课题经费，一个是课题数量，这都是好东西。”
“有钱才能好做事。”袁威宏与方子业说着，不能对外道的话。
……
门诊结束，方子业并未多耽搁，帮忙袁威宏放了白大褂后，就直接去了实验室里。
邓勇教授那边的团队虽然大，但洛听竹并不特殊，所以她没有做实验的经费，需要自己去努力，前期研究，既然求到了袁威宏这里，袁威宏还应下来了。
那么方子业作为袁威宏团队里的成员，能帮忙自然要尽量帮忙，否则的话，袁威宏也要亲自来实验室。
而，方子业来到实验室里的时候，就发现，洛听竹一直就守在实验室，从下午的两点一直到下午的六点。
比任何人都要担心实验的进度。
她做申请课题的前期实验的经费都不多，因此容不得丝毫的浪费和大意。
“方师兄，我觉得这个培养皿已经差不多可以计数了，您来看一下？”洛听竹在看到方子业到后，赶紧站起，同时把无菌检查手套、一次性套装口罩等，都已经给方子业备好。
“嗯，好，吃饭了吗？”
“我们要不先点一个外卖？”方子业进来之后，一边问。
“已经点了的，师兄。”洛听竹点头，表示自己的后勤工作做得非常到位。一心只想着细胞宝宝以及实验。
transwell实验后，就是要进行细胞计数，以客观的数据来表示肿瘤细胞的侵袭能力。
因是前期实验，因此只需要用直接计数法即可。
然后，即便是直接计数法，仍需要一定的实验步骤，才能相对客观反应——
先固定好细胞，不再让其移动。
用镊子小心取出小室，吸干上室培养基，用棉签轻轻擦拭Matrigel和上室内的细胞。取新的24孔板加入4%多聚甲醛600μL，将小室放入后固定20-30min。
然后再进行细胞染色！
取出小室，吸干上室固定液，移到预先加入约800μl 0.1%-0.2%结晶紫的孔中染液的孔中，染色15-30min。除去未与细胞结合的结晶紫，用棉签轻轻擦拭小室的上侧，将非特异性结合于小室上表面的染料擦掉，以便后续镜检计数……
这一步，方子业非常期待，因为不管是别人的细胞实验，还是自己的，只要自己发现了，而且参与了实验，肯定就有学识点的收益！
两人转战到显微镜前…
*注：本文中涉及到的一些实验步骤，一部分是经简化版本，主要是完全一股脑地放上来，懂的人倒是看懂了，大部分人都没看懂，考虑到大部分书友的感受，大家看个大概即可。
总结：transwell实验是检测肿瘤细胞侵袭能力的，通过技术表示侵袭能力强弱，操作不算简单，但是一种证明能力的工具。苦读书 www.kudushu.org
三年来，袁威宏几乎很少看到过自己的学生会这么开心。
方子业看着自己刚提升了创伤外科基础理论后，学识点余额再次攀升到22.1！
转头说：“师父，临床和科研我都喜欢，我其实喜欢对未知探索的过程。”
心里默默说，本来这样探索过程中带来的学识点，才是最让我开心的。可久而久之，我发现这个过程，其实也是一种享受。
“晚上你还要去实验室吧？我就不叫你出去吃饭了。”袁威宏看了看手表上的时间，指向了十七点整，距离下班还有半小时。
“嗯，师父，洛师妹transwell小室实验，今天还要去看一下孵养状态。”方子业点了点头，同时侧身往外再看了一眼，确定暂时没有复诊病人在外候着，这才稍稍把门推了一下。
如此更方便说话。
未下班之前的门诊日清闲时间，其实也是值得享受的。
方子业就给袁威宏的一次性茶水杯里，再接了一杯热水。
“上次那种枞树菌，还能搞得到吗？我可以买一点。”袁威宏忽然这么问了一嘴。
“啊？这个季节已经过时了，十月初，是最后一批，现在很难找了，不过我可以帮您问问，师父。”方子业眼皮快速地闪动了几下。
按理说，老师有想吃的东西，这么好的老师，想方设法也得帮个忙。
只是过季节的山货，这还真不是想办法就能搞得到的，若是那种冰冻的，估计口味又没那么好。
“过了就算了，别费神了，我只是随口一问。别往心里去。”
“你更要上心的事情是好好帮着听竹把申请课题的前期研究做好，她属于是非名额内的博士研究生，邓勇教授一开始不同意她来就读，是因为着实课题基金有限。”
“邓勇教授本来收了的学生，再加上新来的博士研究生，肯定要保证他们先毕业，洛听竹如果想要多拿到基金做课题的话，就得她自己稍微努力一下了。”
“这是没办法的事情。其实她如果待内科，挺好的。”袁威宏转移了话题。
方子业则笑着说：“洛师妹可能是看上了我们骨科老师们的强悍肌肉，才来了我们创伤外科。”
袁威宏闻言一怔。
接着恍惚地摸了摸手表，叹了一口气：“如果原生家庭一般的孩子，有时候美貌不是幸运，还是一种原罪。”
“这就是生活啊，一地鸡毛。”
这个话题太过惆怅，方子业很难感同身受，他自己的家庭，是相对幸福的。如今父母还愿意每个月支援两千左右的生活费。
“哦，对了，子业，你如果细胞实验技术操作都比较好的话，所有的实验流程都可以一次到两次就能解决，我们经费本上，是可以节省腾挪出来一丢丢，给你和揭翰两个人，发点劳务费的。”袁威宏对方子业眨了眨眼睛。
方子业若有所思，眼珠子转了一圈。
不管是任何课题资金，给硕士研究生发一丢丢，比如说三五千的劳务费，是正常，合法、合理、合规的支出。
只是一般的经费本，不会多出来这一笔闲钱。毕竟不是每个人的每个实验流程，都可以一步到位。
是需要好几次才能够成功的，除非是熟练度非常高。
但，方子业觉得自己是有那么一丢丢可能多节省一点实验耗材费用的，如此一来，倒还真有可能一年拿个两三千的劳务费。
只是，这样一横向对比，真的是旱的旱死，涝的涝死了。
“谢谢师父。”方子业也不富裕，就不敢有多余想法了。
袁威宏则摆了摆头：“嗯！”
“经费要好好用，精打细算，该节省的地方可以节省，但不该节省的，千万不能省，严格保证无菌原则，移液管虽然贵，但该用就用，保证实验流程的严谨性。”
“省钱不是这么省的，最主要的是要把这个课题的结果做出来，稍微推动一丢丢科学的门缝儿，这就是我们拿着国家给的钱，该做的事情。”
“还有就是，揭翰如今的科研底蕴非常深厚，他申请市级、校级课题起来，与你的底蕴也都差不多，所以他后续啊，也可能会为我们团队多拿一点钱。”
“一个是课题经费，一个是课题数量，这都是好东西。”
“有钱才能好做事。”袁威宏与方子业说着，不能对外道的话。
……
门诊结束，方子业并未多耽搁，帮忙袁威宏放了白大褂后，就直接去了实验室里。
邓勇教授那边的团队虽然大，但洛听竹并不特殊，所以她没有做实验的经费，需要自己去努力，前期研究，既然求到了袁威宏这里，袁威宏还应下来了。
那么方子业作为袁威宏团队里的成员，能帮忙自然要尽量帮忙，否则的话，袁威宏也要亲自来实验室。
而，方子业来到实验室里的时候，就发现，洛听竹一直就守在实验室，从下午的两点一直到下午的六点。
比任何人都要担心实验的进度。
她做申请课题的前期实验的经费都不多，因此容不得丝毫的浪费和大意。
“方师兄，我觉得这个培养皿已经差不多可以计数了，您来看一下？”洛听竹在看到方子业到后，赶紧站起，同时把无菌检查手套、一次性套装口罩等，都已经给方子业备好。
“嗯，好，吃饭了吗？”
“我们要不先点一个外卖？”方子业进来之后，一边问。
“已经点了的，师兄。”洛听竹点头，表示自己的后勤工作做得非常到位。一心只想着细胞宝宝以及实验。
transwell实验后，就是要进行细胞计数，以客观的数据来表示肿瘤细胞的侵袭能力。
因是前期实验，因此只需要用直接计数法即可。
然后，即便是直接计数法，仍需要一定的实验步骤，才能相对客观反应——
先固定好细胞，不再让其移动。
用镊子小心取出小室，吸干上室培养基，用棉签轻轻擦拭Matrigel和上室内的细胞。取新的24孔板加入4%多聚甲醛600μL，将小室放入后固定20-30min。
然后再进行细胞染色！
取出小室，吸干上室固定液，移到预先加入约800μl 0.1%-0.2%结晶紫的孔中染液的孔中，染色15-30min。除去未与细胞结合的结晶紫，用棉签轻轻擦拭小室的上侧，将非特异性结合于小室上表面的染料擦掉，以便后续镜检计数……
这一步，方子业非常期待，因为不管是别人的细胞实验，还是自己的，只要自己发现了，而且参与了实验，肯定就有学识点的收益！
两人转战到显微镜前…
*注：本文中涉及到的一些实验步骤，一部分是经简化版本，主要是完全一股脑地放上来，懂的人倒是看懂了，大部分人都没看懂，考虑到大部分书友的感受，大家看个大概即可。
总结：transwell实验是检测肿瘤细胞侵袭能力的，通过技术表示侵袭能力强弱，操作不算简单，但是一种证明能力的工具。苦读书 www.kudushu.org
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